25vzmnrw65 10.3205/25vzmnrw65 urn:nbn:de:0183-25vzmnrw657 Meeting Abstract Iwan Iwan Viktoria V

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author Zibert Zibert Andree A

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author Weiand Weiand Matthias M

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author Nadzemova Nadzemova Oksana O

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author Schmidt Schmidt Hartmut H.J. HHJ

Universitätsklinikum Essen, Klinik für Gastroenterologie, Hepatologie und Transplantationsmedizin, Essen, Münster

author Tepasse Tepasse Phil-Robin PR

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author Trebicka Trebicka Jonel J

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author Sandfort Sandfort Vanessa V

Universitätsklinikum Münster, Medizinische Klinik B (Gastroenterologie, Hepatologie, Endokrinologie, Klinische Infektiologie), Münster, Deutschland

author German Medical Science GMS Publishing House

Düsseldorf

610 20250530 germ This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution 4.0 License. Dieser Artikel ist ein Open-Access-Artikel und steht unter den Lizenzbedingungen der Creative Commons Attribution 4.0 License (Namensnennung). M0616 65 Niederrheinisch-Westfälische Gesellschaft für Chirurgie Gesellschaft für Gastroenterologie in Nordrhein-Westfalen e.V. 191. Jahrestagung der Niederrheinisch-Westfälischen Gesellschaft für Chirurgie, 33. Jahrestagung der Gesellschaft für Gastroenterologie Viszeralmedizin NRW 2025 Gastroenterologie Essen 20250612 20250613 65 TextHintergrund und Ziele: Morbus Wilson (MW) ist durch eine Anhäufung von toxischem Kupfer (Cu) gekennzeichnet, hauptsächlich in der Leber und im zentralen Nervensystem. Mit bis zu 40% ist die Punktmutation H1069Q die häufigste Mutation des Cu-Transporters ATPase7B in westlichen Populationen. Ziel dieser Studie ist zu untersuchen, ob eine CRISPR/Cas9-vermittelte Genkorrektur von H1069Q in induzierten pluripotenten Stammzellen (iPSCs) deren Fähigkeit zur Differenzierung in hepatozytenähnliche Zellen (HLCs) beeinträchtigt und eine Cu-Resistenz verleiht.Methode: In dieser Studie wurden Urin-Epithelzellen von MW-Patienten, die die heterozygote Mutation H1069Q/N1270S tragen, durch transiente Transfektion in iPSCs umprogrammiert. Zur Initiierung der homologiegeleiteten Reparatur wurden iPSCs mit dem Plasmid PX459.H1069Q transfiziert, das die H1069Q-spezifische sgRNA-Sequenz und die Sequenz für das Cas9-Enzym trägt. Als Reparaturvorlagen dienten eine Reihe von einzelsträngigen Oligodesoxynukleotiden (ssODNs), die simultan transfiziert wurden. Einzelne iPSC-Klone wurden durch Sanger-Sequenzierung analysiert. Die korrigierten iPSC-Klone wurden durch standardisierte Protokolle in HLCs differenziert und mittels real-time RT PCR auf hepatozytenspezifische Markergene untersucht. Die Lebensfähigkeit von ATP7B-korrigierten und unkorrigierten HLCs wurde mittels MTT-Assays nach Inkubation in toxischen Cu-Konzentrationen bestimmt. Ergebnisse: 46% aller analysierten iPSC-Klone wurden nach CRISPR/Cas9-vermittelter Reparatur erfolgreich korrigiert. Die zweite Mutation war nicht betroffen. Die korrigierten iPSC-Klone zeigten nach zweiwöchiger Behandlung eine HLC ähnliche Morphologie. Die korrigierten HLCs zeigten eine Hochregulierung hepatozytenspezifischer Markergene (z.B. Albumin, AFP, HNF4α), was ihren hepatischen Charakter bestätigt, sowie eine verbesserte Resistenz gegenüber hohen Cu-Konzentrationen.Schlussfolgerung: Diese Studie zeigt, dass die CRISPR/Cas9 Technologie bei iPSCs hoch effizient ist und ihre Fähigkeit zur Differenzierung in HLCs nicht beeinträchtigt. Diese Technologie verfügt über ein bemerkenswertes therapeutisches Potenzial zur Korrektur des ATP7B-Gens, was zu einer verbesserten Cu-Resistenz führt und somit einen Beitrag zu neuen therapeutischen Ansätzen für MW leistet. 0 0 0 0