25rhk043 10.3205/25rhk043 urn:nbn:de:0183-25rhk0434 Meeting Abstract Mishra Mishra Neha N

Universitätsmedizin Greifswald, Labor Innere Medizin A, Rheumatologie, Greifswald

author Bossaller Bossaller Lukas L

Universitätsmedizin Greifswald, Innere Medizin A, Rheumatologie, Greifswald

author Mohs Mohs Magdalena M

Universitätsmedizin Greifswald, Innere Medizin A, Rheumatologie, Greifswald

author Gross Gross Stefan S

Universitätsmedizin Greifswald, Greifswald

author Wittmann Wittmann Nico N

Universitätsmedizin Greifswald, Greifswald

author Thompson Thompson Paul P

UMass Cancer Center, Department of Biochemistry and Molecular Biotechnology, Worcester

author German Medical Science GMS Publishing House

Düsseldorf

610 20250917 germ This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution 4.0 License. Dieser Artikel ist ein Open-Access-Artikel und steht unter den Lizenzbedingungen der Creative Commons Attribution 4.0 License (Namensnennung). M0627 043 Deutsche Gesellschaft für Rheumatologie Deutsche Gesellschaft für Orthopädische Rheumatologie 53. Kongress der Deutschen Gesellschaft für Rheumatologie (DGRh), 39. Jahrestagung der Deutschen Gesellschaft für Orthopädische Rheumatologie (DGORh) Deutscher Rheumatologiekongress 2025 Experimentelle & Translationale Rheumatologie Wiesbaden 20250917 20250920 ET.25 TextEinleitung: Störungen im Kalziumhaushalt sind mit zahlreichen humanpathologischen Zuständen assoziiert . Unsere Daten zeigen erstmals, dass leicht erhöhte extrazelluläre Kalziumkonzentrationen nicht nur zur Inflammasomaktivierung , , , sondern auch zur Freisetzung von METs (Macrophage extracellular traps) durch humane Makrophagen führen. Diese Immunreaktion ähnelt der NETose neutrophiler Granulozyten, unterscheidet sich jedoch in den involvierten Pathways und den DNA-assoziierten Proteinen.Methoden: Zur Analyse der METose wurden primäre humane Monozyten in Makrophagen differenziert und unter verschiedenen Bedingungen mit extrazellulärem Kalzium (exCa2+), LPS sowie spezifischen Inhibitoren (u.a. MCC950, AFM 30a, LDC7559) stimuliert. Die Bildung von METs wurde konfokalmikroskopisch, mittels Pico-Green Assay sowie durch Nachweis von Histon-Citrullinierung und Inflammasom-Aktivierung (GSDMD-Cleavage, ASC-Speck-Bildung, IL-1β-Freisetzung) charakterisiert.Ergebnisse: Extrazelluläres Kalzium induziert die MET-Bildung unabhängig von TLR4-Stimulation und parallel zur NLRP3-Inflammasom-Aktivierung. Die Freisetzung der METs ist abhängig von PLC-Aktivität, mitochondrialer ROS-Produktion und einer PAD2-vermittelten Histon-Citrullinierung und erfolgt durch Plasmamembranruptur, nicht aber mittels GSDMD Poren-Formation. Unsere inhibitorischen Experimente mit MCC950 zeigen überraschenderweise, dass die Histon-Citrullinierung und DNA-Freisetzung durch NLRP3 Inhibition signifikant reduziert wird. Die Zusammensetzung der METs variiert je nach Differenzierungszustand der Makrophagen: GM-CSF-differenzierte MDM produzierten bakterizid potentere METs mit MMP12, wohingegen M-CSF-Makrophagen METs mit geringer bakterieller Abtötungskapazität ohne MMP12 freisetzten. Zudem lagert sich das Inflammasom-Adaptorprotein ASC an extrazelluläre DNA-Fasern an – ein bislang unbekannter Bestandteil von ETs.Schlussfolgerung: Extrazelluläres Kalzium fungiert nicht nur als Auslöser für die METose, sondern gleichzeitig über eine Inflammasom-Aktivierung als Verstärker der angeborenen Immunantwort. Diese Erkenntnisse eröffnen neue Perspektiven für das Verständnis entzündlicher und insbesondere auch granulomatöser Erkrankungen. Zukünftige therapeutische Strategien, z.B. im Falle von granulomatösen Erkrankungen , könnten auf eine Regulation der METose abzielen. Walker MD Shane E Hypercalcemia: A Review 2022 JAMA 1624-36 Walker MD, Shane E. Hypercalcemia: A Review. JAMA. 2022 Oct 25;328(16):1624-36. DOI: 10.1001/jama.2022.18331 http://dx.doi.org/10.1001/jama.2022.18331 Rossol M Pierer M Raulien N Quandt D Meusch U Rothe K Schubert K Schöneberg T Schaefer M Krügel U Smajilovic S Bräuner-Osborne H Baerwald C Wagner U Extracellular Ca2+ is a danger signal activating the NLRP3 inflammasome through G protein-coupled calcium sensing receptors 2012 Nat Commun 1329 Rossol M, Pierer M, Raulien N, Quandt D, Meusch U, Rothe K, Schubert K, Schöneberg T, Schaefer M, Krügel U, Smajilovic S, Bräuner-Osborne H, Baerwald C, Wagner U. Extracellular Ca2+ is a danger signal activating the NLRP3 inflammasome through G protein-coupled calcium sensing receptors. Nat Commun. 2012;3:1329. DOI: 10.1038/ncomms2339 http://dx.doi.org/10.1038/ncomms2339 Lee GS Subramanian N Kim AI Aksentijevich I Goldbach-Mansky R Sacks DB Germain RN Kastner DL Chae JJ The calcium-sensing receptor regulates the NLRP3 inflammasome through Ca2+ and cAMP 2012 Nature 123-7 Lee GS, Subramanian N, Kim AI, Aksentijevich I, Goldbach-Mansky R, Sacks DB, Germain RN, Kastner DL, Chae JJ. The calcium-sensing receptor regulates the NLRP3 inflammasome through Ca2+ and cAMP. Nature. 2012 Dec 6;492(7427):123-7. DOI: 10.1038/nature11588 http://dx.doi.org/10.1038/nature11588 Murakami T Ockinger J Yu J Byles V McColl A Hofer AM Horng T Critical role for calcium mobilization in activation of the NLRP3 inflammasome 2012 Proc Natl Acad Sci U S A 11282-7 Murakami T, Ockinger J, Yu J, Byles V, McColl A, Hofer AM, Horng T. Critical role for calcium mobilization in activation of the NLRP3 inflammasome. Proc Natl Acad Sci U S A. 2012 Jul 10;109(28):11282-7. DOI: 10.1073/pnas.1117765109 http://dx.doi.org/10.1073/pnas.1117765109 Sharma OP Hypercalcemia in granulomatous disorders: a clinical review 2000 Curr Opin Pulm Med 442-7 Sharma OP. Hypercalcemia in granulomatous disorders: a clinical review. Curr Opin Pulm Med. 2000 Sep;6(5):442-7. DOI: 10.1097/00063198-200009000-00010 http://dx.doi.org/10.1097/00063198-200009000-00010 0 0 0 0