25nrwgu52
10.3205/25nrwgu52
urn:nbn:de:0183-25nrwgu521
Meeting Abstract
Spezifischer Reporter Knock-In zur Modulation von Antikörper-Wirkstoff-Konjugaten- oder Radioliganden-Targets im Prostatakarzinom
Kalali
Kalali
Cimin
C
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Wüstmann
Wüstmann
Neele
N
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Humberg
Humberg
Verena
V
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Vieler
Vieler
Julia
J
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Schlack
Schlack
Katrin
K
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Bögemann
Bögemann
Martin
M
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Schrader
Schrader
Andres Jan
AJ
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
Bernemann
Bernemann
Christof
C
Forschungslabor, Klinik für Urologie und Kinderurologie – Universitätsklinikum Münster, Münster, Deutschland
author
German Medical Science GMS Publishing House
Düsseldorf
610
20250402
germ
This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution 4.0 License.
Dieser Artikel ist ein Open-Access-Artikel und steht unter den Lizenzbedingungen der Creative Commons Attribution 4.0 License (Namensnennung).
M0609
52
Nordrhein-Westfälische Gesellschaft für Urologie e.V.
70. Kongress der Nordrhein-Westfälischen Gesellschaft für Urologie
Posterbegehung II
Münster
20250403
20250404
P 2.9
TextEinleitung: Gezielte Therapie (targeted therapy) durch Radioligandentherapie (RLT) oder Antikörper-Wirkstoff-Konjugate (ADC) gewinnen zunehmend an Bedeutung in der personalisierten Tumortherapie. Für eine effektive Wirkung sind gewebe- und tumorspezifische Oberflächenmarker wie PSMA oder KLK2 unerlässlich. Eine gezielte Hochregulierung solcher Ziel-Proteine in Tumorzellen durch die kombinatorische Gabe von z.B. Androgenrezeptor (AR) inhibierenden Medikamenten (ARTA), bietet das Potenzial, die klinische Effizienz der Medikamente zu verstärken. Ziel dieser Arbeit ist die Etablierung eines endogenen Reporter-Knock-Ins für die RLT- bzw. ADC -Targets PSMA (FOLH1) und KLK2 als Basis für High-Throughput-Screening-Assays zur Steigerung der Targets und somit zur Steigerung der Effizienz neuer RLT- oder ADC-Therapien.Methode: PCa-Zelllinien wurden mit ARTA (Apalutamid, Enzalutamid und Darolutamid) behandelt und die differentielle Expression von PSMA bestimmt. Für den Reporter-Knock-In wurden spezifische guideRNAs für den FOLH1 Exon-19 bzw. den KLK2-Exon-5-Stoppcodon-Locus in einen CRISPR/Cas9-Vektor kloniert. Ein Donorkonstrukt, bestehend aus 2 Homologiearmen des jeweiligen Locus, einem 2A-Linker und einem GFP-Gen, wurde mit dem CRISPR/Cas9-Vektor in LNCaP-Zellen transfiziert. Mittels Durchflusszytometrie (FACS) wurden GFP-positive Zellen isoliert.Ergebnisse: Die Behandlung mit ARTA zeigt eine konzentrationsabhängige Induktion der FOLH1(PSMA)-mRNA-Expression in LNCaP- und weiteren Prostatakrebszelllinien. Durch FACS-Analysen konnte zudem die Steigerung der PSMA-Protein-Expression nachgewiesen werden.Erste Experimente deuten auf einen stabilen Knock-In des GFP-Reporters für PSMA hin. Weitere Untersuchungen, wie qPCR, DNA-Sequenzierung und Fluoreszenzmikroskopie, werden verwendet, um den stabilen Einbau zu bestätigen, bevor High-Throughput-Screening-Assays durchgeführt werden.Schlussfolgerung: ADCs und RLT werden zukünftig in einer Vielzahl onkologischer Indikationen Anwendung finden. Die Entwicklung endogener Reporter-Knock-Ins bietet ein vielversprechendes präklinisches Werkzeug, um die Expression von Target-Genen in High-Throughput-Assays im Sinne einer Effizienzsteigerung zu modulieren und zu überwachen. Unsere Reporter-Knock-In-Konstrukte können neben dem PCa auch für andere Tumorentitäten verwendet werden, z.B. das ADC-Zielprotein NECTIN-4 im Urothelkarzinom. Dies stellt einen wichtigen Schritt in Richtung präzisionsmedizinischer Krebstherapie dar.
0
0
0
0